Solubilization and partial characterization of ouabain-insensitive Na+-ATPase from basolateral plasma membranes of the instestinal epithelial cells

It has been proposed that intestinal sodium transport is mediated by two different active mechanisms: the ouabain-sensitive Na+/K+-ATPase and ouabain-insensitive Na+-ATPase. In order to determine the optimum conditions to solubilize the membrane-bound Na+-ATPase of enterocyte, basolateral plasma membranes were solubilized using different amounts of octyl glucoside (O.G), Tween 20, octaethylene glycol monododecyl ether (C12E8), and polyoxyethylene 9-lauryl ether (C12E9). Solubilized fractions were assayed for protein concentration and ATPase activity and characterized by electrophoresis analysis. Optimal solubilization of Na+-ATPase was obtained after mixing of 1 mg of basolateral plasma membrane with 1.5 mg of C12E9. Under these conditions, C12E9 solubilized over 60% membrane protein and Na+- and Na+/K+- ATPases activities were recovered over 80% in the soluble fraction without inactivation. In addition, when 25 % glycerol and 2 mM ATP were added, the solubilized Na+-ATPase was stable after 3 days at 4°C. The C12E9-solubilized Na+-ATPase presented the following kinetic characteristics: 1) is only stimulated by the Na+ salt, 2) K0.5 for Na+= 4.62 ± 0.06 mM, 3) is similarly stimulated by the Na+ salt of different anions, 4) optimal pH= 7.0, 5) inhibited by furosemide (IC50= 0.52 ± 0.10 nm). These kinetic properties of the solubilized Na+-ATPase were similar to those described to the native membrane-bound enzyme. This work reports for the first time, solubilization and characterization of a fully active and stable Na+-ATPase from basolateral plasma membranes of enterocyte using C12E9.

Ha sido propuesto que el transporte intestinal del sodio es mediado por dos mecanismos: la ATPasa de Na+/K+, inhibida por ouabaina y la ATPasa de Na+ la cual es insensible a la ouabaina y es inhibida por la furosemida. Con la finalidad de determinar las condiciones óptimas para solubilizar la ATPasa de Na+ del enterocito, membranas plasmáticas laterobasales fueron solubilizadas utilizando diferentes detergentes, octyl glucoside, Tween 20, C12E8 y C12E9. La solubilización de la ATPasa de Na+ y de la ATPasa de Na+/K+ fue óptima después de mezclar 1 mg de membranas con 1,5 mg de C12E9. El C12E9 solubilizó más del 60% de las proteinas de membranas y las ATPasas de Na+ y Na+/K+ fueron recuperadas en un 80% en la fracción soluble. Adicionalmente, cuando glicerol al 25 % y ATP 2 mM fueron utilizados, la ATPasa de Na+ fue estable despues de 3 dias. La ATPasa de Na+ soluble demostró las siguientes características cinéticas: 1) es específicamente estimulada por sales de Na+; 2) K0.5 para Na+= 4.62 ± 0.1 mM; 3) es estimulada por todas las sales de Na+, 4) pH óptimo= 7.0; 5) es inhibida por furosemida (IC50= 0,52 ± 0,10 nm). Las características cinéticas de la enzima solubilizada fueron similares a las descritas para la forma de la enzima unida a la membrana. Este trabajo demuestra la solubilización y caracterización de la ATPasa Na+ a partir de membranas laterobasales del enterocito usando C12E9.

Evolución del concepto de lepra e instituciones en Colombia / Evolution of the concept of leprae and institutions in Colombia

Este trabajo refleja la evolución del concepto de lepra que dependió de circunstancias históricas determinadas y estrechamente relacionadas con el manejo institucional. Notamos que a pesar de los avances científicos no se ha logrado determinar muchos aspectos de la enfermedad tan importantes como los postulados de Koch. Desde los leprocomios iniciales, con los cuales se intentó solucionar el problema de salud pública que reemplazaba la lepra hasta el manejo individualizado, integral y ambulatorio actúal, se evidencia una inadecuada e irregular enfoque del problema que da como resultado en que su control no haya sido el esperado y que aún en el momento no se cuente con una estadística veráz acerca de la mágnitud del mismo en el País